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葡聚糖凝膠分離的步驟方法
發布時間:2019-04-11 點擊次數:265次
  葡聚糖凝膠分離適用于天然產物在有機溶劑中的純化。例如:類固醇、萜類、脂類以及小分子多肽等,葡聚糖凝膠同時適用于分子類別非常相似的物質的分離和工業規模的制備,既可用于初步純化步驟,也可以用于zui終精制步驟。
  葡聚糖凝膠分離方法:
  1. 乙醇浸泡:在室溫下,將干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小時,并不斷攪拌以保證凝膠溶脹,用無鹽水洗去殘存的乙醇濾干;
  2. 無鹽水浸泡:室溫下,在無鹽水中充分溶脹24小時,間隙攪拌,以保證凝膠的完全溶脹,然后;
  3. 鹽酸浸泡:在常溫下再用0.2N HCl浸泡12小時,間隙攪拌,濾干,水洗只中性;
  4. 將溶脹好的凝膠脫氣后(真空抽濾或超聲波)根據裝柱要求一次性置入柱內,注意保持濕態裝柱,并避免柱內產生氣泡或斷層;
  5. 上樣前平衡層析柱至少3-5 個柱體積直到記錄儀基線變得平穩為止(流出液的PH值等于上柱的Buffer 的PH值);
  6. 凝膠過濾的上樣量一般為5%的柱床體積,我們建議初次上樣控制在1-2%的床體積,視分離情況可以調整;脫鹽時上樣量可以達到20% 的柱床體積,柱高的選擇也與分離要求相關,柱高控制在40-50cm以下,過高的凝膠層會引起較大的反壓,應當盡可能避免。難分離物質要有一定柱高和流速控制,脫鹽時高徑比為5:1 即可;
  7. 洗脫方法:可以用無鹽水,也可以采用上柱時的緩沖液洗脫;在上柱Buffer 中加入NaCl等梯度洗脫或鹽梯度洗脫也可以完全讓葡聚糖凝膠分離純化;
  8. 在位清洗(CIP)凝膠使用十次后作一次CIP,目的是去除柱床內沉淀的及頑固殘留的蛋白。方法是以40cm/h 用1M 氫氧化鈉反向洗四個柱體積,再以至少三個柱體積平衡緩沖液再生。
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