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一文看懂蛋白質提取液分離純化技術對比
點擊次數:209 發布時間:2019-04-23
  一文看懂蛋白質提取液分離純化技術對比
  蛋白質在組織或細胞中一般都是以復雜的混合物形式存在,每種類型的細胞都含有成千種不同的蛋白質。蛋白質的分離和提純工作是一項艱巨而繁重的任務,到目前為止,還沒有一個單獨的或一套現成的方法能把任何一種蛋白質從復雜的混合物中提取出來,但對任何一種蛋白質都有可能選擇一套適當的分離提純程序來獲取高純度的制品。
  不同種類的蛋白質在分子大小方面有一定的差別,可用一些簡便的方法,使蛋白質混合物得到初步分離。
  1、蛋白質提取液分離純化透析和超濾
  透析在純化中極為常用,可除去鹽類(脫鹽及置換緩沖液)、有機溶劑、低分子量的抑制劑等。透析膜的截留分子量為5000左右,如分子量小于10000的酶液就有泄露的危險,在純化中極為常用,可除去鹽類、有機溶劑、低分子量的抑制劑等。超濾一般用于濃縮和脫色。
  2、離心分離置換緩沖液
  許多酶富集于某一細胞器內,勻漿后離心得得到某一亞細胞成分,使酶富集10~20倍,再對特定的酶進行純化。差速離心,分辨率較低,僅適用于粗提或濃縮。速率區帶法,如離心時間太長所有的物質都會沉淀下來,故需選擇分離時間,可得到相當純的亞細胞成分用于進一步純化,避免了差速離心中大小組分一起沉淀的問題,但容量較小,只能用于少量制備。等密度梯度離心常用的離主介質有蔗糖、聚蔗糖、氯化銫、溴化鉀、碘化鈉等等。
  3、凝膠過濾
  這是根據分子大小分離蛋白質混合物有效的方法之一,注意使要離的蛋白質分子量落在凝膠的工作范圍內。選擇不同的分子量凝膠可用于脫鹽、置換緩沖液及利用分子量的差異除去熱源。
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