足球比分

當前位置:
首頁 > 技術文章 > 疏水層析填料質量性能對試驗影響分析
技術支持Article
疏水層析填料質量性能對試驗影響分析
點擊次數:179 發布時間:2019-03-26
  疏水層析填料質量性能對試驗影響分析
  一、疏水層析填料的選擇
  *不同的配基的疏水填料與蛋白的結合能力強弱不同,在進行疏水層析時要對不同的疏水填料進行篩選對比。
  *同一配基的疏水層析填料由于配基密度不同,其和蛋白的的疏水作用力也不同,篩選填料時也要對不同的配機密度的疏水填料進行對比篩選。
  二、樣品的性質
  蛋白質的疏水性強弱取決于其表面疏基團的分布,同時與樣品緩沖液的離子強度,離子種類,pH,所處的溫度都有一定的關系,在進行疏水層析時要保持恒定的溫度,且要對樣品緩沖液的離子種類及離子強度,pH進行篩選對比分析。
  三、層析柱反壓升高或柱效下降
  1、確保壓力的升高是由層析柱引起的
  檢查在線濾器;從組分收樣器開始斷開管線,觀察壓力變化排除其他原因造成的壓力升高。
  2、層析柱使用過程雜質的積累
  對填料進行清洗:先用0.5M的氫氧化鈉洗1CV,然后用去離子水把堿洗掉(5CV),之后在用30%的異丙醇洗1CV,異丙醇洗完后用去離子水洗5CV,上樣1CV 1mg/ml胃蛋白酶溶液(溶于0.1M乙酸,0.5M氯化鈉,降解沉淀在層析柱上的蛋白),室溫過夜,再用1.5CV 0.2M NaOH清洗,再用4CV去離子水清洗。
  3、柱床太高
  疏水層析裝填高度建議在10-20cm,大于20cm反壓增大。
  4、流速過快
  使用適當的流速。
  5、疏水層析填料被污染或老化
  隨著填料的使用,一些雜質的積累會使層析填料的孔徑發生變化(如堵塞,非特異性吸附積累,微生物污染,破碎等),導致其排阻能力發生偏差而影響分離度。此時可對填料進行CIP清洗,若清洗后還不能達到分離要求,就要更換新的填料。
  三、層析柱進氣泡
  大量進行很好脫氣的去離子水反相沖洗平衡層析柱(30cm/h),氣泡會被逐漸帶出層析柱。
  四、洗脫時沒有收到目標物質或者洗脫量太少
  目標物沒有與介質結合或結合量較少
  先確認目標物質是否和填料結合
  洗脫時間不夠
  降低流速,延長洗脫液的保留時間
  目標物質和填料結合強度太高
  降低平衡液中鹽濃度或更換鹽的種類 或或更換結合能力較弱的疏水介質在 洗脫液中加入添加劑(少量去污劑或 者低濃度有機試劑)
  層析緩沖液及溫度
  確保疏水層析時的溫度適宜,且選擇合適的緩沖液。
  疏水層析時目標物不與填料結合或結合量較低
  *確保合適的保留時間(上樣速度)。
  *目標物質和疏水層析填料疏水作用力太弱,更換疏水性強的填料。
  *緩沖液的離子強度太低,提高緩沖液的離子強度。
聯系人
在線客服
用心服務成就你我
中国竞彩网 山西福彩网 七星彩票网 青海福彩网 西藏福彩网 西藏福彩网 上海福彩网 湖南福彩网