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Sephadex LH-20 使用說明
點擊次數:549 發布時間:2018-06-02

Sephadex  LH-20使用說明
    北京英萊克科技提供的美國GE Sephadex  LH-20是由葡聚糖G-25羥丙基化加工而成,屬于分子篩凝膠,尤其適用于天然產物在有機溶劑中的純化。例如:類固醇、萜類、脂類以及小分子多肽等,Pharmadex  LH-20同時適用于分子類別非常相似的物質的分離和工業規模的制備,既可用于初步純化步驟,也可用于zui終精制步驟,如非對映同分異構體的分離。
制備凝膠懸浮液
Sephadex  LH-20在使用之前必須進行溶脹。在溶脹的過程中,要盡量避免過分攪拌,否則會破壞球形膠粒,且要避免使用磁力攪拌器。
1.  在室溫下,將凝膠溶脹于層析溶劑中至少三小時,溶脹后膠體積的大小決定于所使用的溶劑系統,請參考后頁之干膠溶脹表計算特定柱體積所需要干膠的量。
2.  使溶脹膠體積沉淀之后占總體積的75%,上層溶劑占25%,這時,懸浮液從一個容器倒入另一容器時膠粒可移動。
3.  將溶脹后的凝膠根據裝柱要求均勻倒入柱內,在保證膠粒不變形的前提下,應在盡可能高的壓力下裝柱,反壓不要超過1.5ba。

平衡
上樣前,用洗脫液平衡層析柱至少兩個柱體積直到基線變得平穩為止,如改變溶劑應該注意凝膠在新溶劑中的溶脹性質,并根據性質確定柱高調節器的位置,如使用相同的溶劑,在以后的層析中柱平衡可以省略。
洗脫液
為確保延長層析柱的使用壽命,所有的緩沖液都應該離心或經過0.45um的膜過濾以除去雜質。
樣品
樣品體積應該占柱總體積的1-2%,同樣在使用之前樣品應該離心或經過0.45um的膜過濾。
洗脫
洗脫流速應根據情況而定,zui大張性流速約12cm/min(反壓1.5ba),建議流速為1-10cm/h。總體來說,較低的流速,具有較高的分辯率。
再生
凝膠再生通常是先用2-3個柱體積的洗脫液進行清洗,如更換洗脫液,則需要重新平衡。
溶脹體積
由于Pharmadex  LH-20的溶脹體積依賴于溶劑,所以對于不同直徑的柱可根據比例增加或減少舊柱體積以便計算出新體積。
新體積=舊體積×(新柱體積/舊柱體積)

表一 干膠溶脹表

溶 劑

床體積(mL凝膠/g干膠粉末)

Dinethyl sulphoxide 二甲亞砜

4.4~4.6

Pyridine 嘧啶

4.2~4.4

Water

4.0~4.4

Dimethylformamide 二甲基甲酰胺

3.8~4.2

Saline 生理鹽水

3.9~4.1

Methanol 甲醇

3.8~4.1

Methane dichloride 二氯乙烷

3.8~4.1

Chloroform1 

3.8~4.1

Propanol 丙醇

3.7~4.0

Ethanol2 乙醇

3.6~3.9

Isobutanol 異丁醇

3.6~3.9

Formamide 甲酰胺

3.6~3.9

Methylene dichloride 二氯甲烷

3.6~3.9

Butanol 丁醇

3.5~3.8

Isopropanol 異丙醇

3.3~3.6

Tetrahydrofuran 四氫呋喃

3.3~3.6

Dioxane 二氧雜環乙烷

3.2~3.5

Acetone 丙酮

2.4~2.6

Acetonitrile3 乙腈

2.2~2.4

Carbon tetrachloride 四氯化碳

1.8~2.2

Benzene

1.6~2.0

Ethyl acetate 乙酸乙酯

1.6~1.8

Toluene 甲苯

1.5~1.6

1.  包含1%的乙醇。 2.包含1%的苯。 3.溶脹膠體積小于2.5mL/g的溶劑沒有使用價值。

 

 

膠的性質

排阻極限

4-5KD(與所有溶劑有關)

上樣量  

 

吸附模式

取決于所需分辨率

分子量大小

小于總體積的20%

正相分配

小于總體積的1%

膠粒形狀

球形,多孔

顆粒大小(干)

18-111um(直徑)

顆粒大小中間值(干)

70um(直徑)

顆粒大小(甲醇)

27-163um(直徑)

顆粒大小中間值(甲醇)

103um(直徑)

zui大線性流速

720cm/hr

參考線性流速

60cm/hr

pH的穩定性  

 

操作中

2-11

清洗中

2-13

化學穩定性

在許多水溶液及有機溶劑系統中都定。在pH2以下或強氧化劑中不穩定

高壓滅菌

121℃可忍受20分鐘

操作溫度

4℃到40℃

保存條件  

 

新填料

4-25℃(干燥)

使用后填料

4-8℃,pH6-8,切勿冷凍,加入抑菌劑(如20%乙醇,0.04%疊氮鈉)

  

 

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